3М Petrifilm - Coliform Count Plate - Петрифильмы для подсчета колиформных бактерий
Описание
Петрифильм Petrifilm Coliform Count (СС) содержит в качестве питательной основы среду VRB (кристаллический фиолетовый с желчью), в которой вместо агара используется водорастворимый гель. Гель активируется при добавлении воды и застывает при комнатной температуре. Тетразолиевый индикатор облегчает подсчет колоний на петрифильме. Верхняя пленка задерживает газ, образующийся в ходе ферментации лактозы колиформными бактериями.
В соответствии со стандартами АОАС International и U.S. FDA Bacteriological Analytical Manual (ВАМ) (Руководство по бактериологии) колиформными бактериями являются грамотрицательные палочки, которые ферментируют лактозу с образованием кислоты и газа. Колиформные бактерии при росте на среде образуют кислоту, что вызывает изменение цвета рН индикатора и приводит к потемнению исходного цвета геля петрифильма. Наличие пузырьков газа вокруг красных колоний подтверждает их принадлежность к колиформным бактериям.
В соответствии со стандартом ISO колиформные бактерии определяются по их способности к росту на специальных селективных средах. Метод ISO 4832 для подсчета колиформных бактерий определяет колиформы по их способности к образованию кислоты на VRB-агаре с лактозой (VRBL). На петрифильмах Petrifilm (CC) колиформы, образующие кислоту, обнаруживаются по красным колониям с газом или без газа. Метод ISO 4831 для подсчета колиформных бактерий методом НВЧ (наиболее вероятных чисел) определяет колиформы по их способности образовывать газ из лактозы на селективном бульоне. На петрифильмах Petrifilm (CC) колиформы образуют красные колонии с газом. Организация AFNOR утвердила использование петрифильмов Petrifilm (CC) в сравнении со стандартами ISO 4831 и 4832 для определения общего количества колиформных бактерий. Организация AFNOR также утвердила Petrifilm (CC) в сравнении со стандартом NF V08-017 для подсчета термотолерантных бактерий.
Область применения
Петрифильмы 3M Petrifilm Coliform Count Plate (СС) используются для количественного определения колиформных бактерий в образцах продуктов и напитках. Петрифильмы также удобно использовать для мониторинга окружающей среды. Время исследования составляет 24 часа. Петрифильмы снижают трудозатраты и дают возможность проводить более частый мониторинг в критических контрольных точках на производстве, обеспечивая лучший контроль и более высокое качество выпускаемой продукции.
Хранение и утилизация
Хранить невскрытые упаковки с петрифильмами следует в холодильнике при температуре 2-8°C. Перед открытием упаковки с петрифильмами следует подождать, чтобы упаковка нагрелась до комнатной температуры. Неиспользованные петрифильмы поместить обратно в упаковку. Чтобы предотвратить контакт с влагой, не хранить открытые упаковки с петрифильмами в холодильнике. Хранить вновь запечатанные упаковки в сухом прохладном месте в течение не более одного месяца. Нахождение вскрытых упаковок петрифильмов при температуре более 25°C и/или относительной влажности свыше 50% может повлиять на их качество. Не используйте петрифильмы, на которых заметны следы обесцвечивания. Срок годности и номер партии указаны на каждой упаковке петрифильмов. Как и все системы для тестирования микроорганизмов, петрифильмы после использования могут содержать жизнеспособные бактерии. Следуйте стандартным методам инактивации и утилизации биологического материала.
Инструкция по использованию
Подготовка образца
1. Для разбавления образца использовать 0,1% пептонную воду, забуференную пептонную воду, физиологический раствор или дистиллированную воду.
Не использовать буферные растворы, содержащие цитрат, бисульфит или тиосульфат, т.к. эти соединения могут ингибировать рост бактерий.
2. Смешать и гомогенизировать образец.
3. Для оптимального роста бактерий довести рН разведенного образца до 6,6-7,2. Для коррекции рН кислых образцов используйте 1 н. NaOH. pH щелочных образцов довести с помощью 1 н. HCl.
Внесение образца
1. Поместить петрифильм Coliform Count Plate (СС) на ровную поверхность.
2. Поднять верхнюю пленку и внести 1 мл образца (или его разведения) на поверхность питательной подложки (в центр) петрифильма Coliform Count Plate (СС).
3. Прокатить верхней пленкой на образец. Избегать захвата пузырьков воздуха.
4. Сразу же поместить пластиковый распределитель в центр петрифильма ровной стороной вниз. Мягко надавить на центр, для распределения образца. Не перемещать и не крутить распределителем по пленке петрифильма!
5. Убрать распределитель и оставить петрифильм на одну минуту для затвердевания геля.
Инкубация
Инкубировать петрифильмы в горизонтальном положении прозрачной стороной вверх. Петрифильмы можно группировать в количестве не более 20 штук. Инкубировать петрифильмы в течение (24±2) часов при (37±1)°C. Установить емкость с водой для создания повышенной влажности в термостате.
Интерпретация
1. Количество колоний на петрифильмах можно учесть автоматически с помощью Petrifilm Plate Reader (PPR), стандартного счетчика колоний или другого подсвечиваемого увеличителя. Подсчитать количество красных колоний с газом или без газа, независимо от их размера и интенсивности окраски. Зона роста составляет примерно 20 см2. Не учитывайте колонии, которые образуются на пенопластовом ограничителе, т.к. они не находятся в селективных условиях.
2. Можно проводить учет колоний на петрифильмах, если их численность превышает 150 колоний. В этом случае подсчитывают количество колоний в одном или более репрезентативных квадратах и определяют среднее количество колоний в квадрате. Умножив среднее количество колоний на 20, получают число колоний на петрифильме.
3. Если количество колоний для подсчета слишком большое, то может образовываться много мелких колоний или много пузырьков газа, а также происходит сильное потемнение цвета геля. При большой концентрации колоний на петрифильме может происходить окрашивание всей зоны роста в темно красный цвет. В этом случае необходимо приготовить разведение образца для получения более точного результата.
4. При необходимости колонии можно изолировать для дальнейшей идентификации. Для этого следует поднять верхнюю пленку и извлечь колонию из геля. Идентифицировать колонию с использованием стандартных методов.
5. По окончании инкубации петрифильмы можно хранить в морозильнике в течение одной недели при температуре (-15C°) для последующего учета. Проводится в тех случаях, когда нет возможности учесть численность сразу после инкубации.
|