3M Petrifilm (RCC) - Петрифильмы для колиформных бактерий (экспресс-метод)

3М Petrifilm - Rapid Coliform Count Plate - Rapid Coliform Count Plate – петрифильмы для подсчета колиформных бактерий (экспресс-метод)

Описание
3M Petrifilm Rapid Coliform Count (RCC) – экспресс-тесты, которые  включает: готовую питательную среду VRB (агар кристаллический фиолетовый с желчью и лактозой), водорастворимый гель, рН-индикатор для обнаружения кислоты и тетразолиевый индикатор, который облегчает учет колоний. Петрифильмы RCC используются для экспресс подсчета колиформных бактерий в сырье, пищевых продуктах, объектах внешней среды.

Стандарты АОАС International и U.S.FDA Bacteriological Analytical Manual (BAM) определяют колиформные бактерии как грамотрицательные палочки, которые при ферментации лактозы образуют кислоту и газ.

Если рост колоний на петрифильмах RCC сопровождается образованием кислоты, то происходит изменение цвета индикатора с красно-оранжевого на желтый. Изменение цвета индикатора свидетельствует о возможном наличии колиформных бактерий (предварительный результат). Образование газа (пузырьки вокруг колоний) является окончательным подтверждением наличия колиформных бактерий.

В соответствии со стандартом ISO колиформные бактерии определяются по их способности к росту на специальной селективной среде. Метод ISO 4832 для подсчета колиформных бактерий определяет колиформы по их способности к образованию кислоты на VRB-агаре с лактозой (VRBL). На петрифильмах RCC колиформы, образующие кислоту, обнаруживаются по желтым зонам, или красным колониям с газом или без газа. Метод ISO 4831 для подсчета колиформных бактерий методом НВЧ (наиболее вероятных чисел) определяет колиформы по их способности образовывать газ из лактозы на селективном бульоне. На петрифильмах RCC колиформы образуют красные колонии с газом. Организация AFNOR утвердила использование петрифильмов RCC в сравнении со стандартами ISO 4831 и 4832. 

Хранение и утилизация
Хранить невскрытые упаковки с петрифильмами следует в холодильнике при температуре 2-8°C. Перед открытием упаковки с петрифильмами следует подождать, чтобы  упаковка нагрелась до комнатной температуры. Неиспользованные петрифильмы поместить обратно в упаковку. Чтобы предотвратить контакт с влагой, не хранить открытые упаковки с петрифильмами в холодильнике. Хранить вновь запечатанные упаковки в сухом прохладном месте в течение не более одного месяца. Нахождение вскрытых упаковок петрифильмов при температуре более 25°C и/или относительной влажности свыше 50% может повлиять на их качество. Не используйте петрифильмы, на которых заметны следы обесцвечивания. Срок годности и номер партии указаны на каждой упаковке петрифильмов. 

Как и все системы для тестирования микроорганизмов, петрифильмы после использования могут содержать жизнеспособные бактерии. Следуйте стандартам методам инактивации и утилизации биологического материала.

Инструкция по использованию

Подготовка образца
1. Для разбавления образца использовать 0,1% пептонную воду, забуференную петонную воду, физиологический раствор или дистиллированную воду. Не использовать буферные растворы, содержащие цитрат, бисульфит или тиосульфат, т.к. эти соединения могут ингибировать рост бактерий. Смешать и гомогенизировать образец. Для оптимального роста бактерий довести рН разведенного образца до 6–8.

2. Для коррекции рН кислых образцов используйте 1 н. NaOH. pH щелочных образцов довести с помощью 1 н. HCl.

3. Измельчить или гомогенизировать образец. При необходимости приготовить десятикратные разведения образца. Использовать разведение 1:10 для постановки других микробиологических тестов.

Внесение образца
1. Поместить петрифильм RCC на ровную поверхность.
2. Поднять верхнюю пленку и внести 1 мл образца или его разведения на поверхность питательной подложки (в центр) петрифильма RCC.
3. Медленно опустить верхнюю пленку на образец. Избегать захвата пузырьков воздуха.
4. Сразу же поместить пластиковый распределитель в центр петрифильма гладкой стороной вниз.
5. Мягко надавить на центр распределителя для равномерного распределения образца. 
    Не перемещать распределитель по пленке!
6. Убрать распределитель и оставить петрифильм на одну минуту для затвердевания геля.

Инкубация
1. Инкубировать петрифильмы RCC в течение (6-24) часов при (37±1)°C в горизонтальном положении прозрачной стороной вверх. Петрифильмы можно группировать в количестве не более 20 штук. 
2. Установить емкость с водой для создания повышенной влажности в термостате.

Интерпретация и учет результатов
Подсвечивание петрифильмов может ускорить обнаружение желтых зон подкисления на петрифильмах RCC. Колонии колиформных бактерий могут начать появляться уже через 6 часов в виде отдельных желтых зон. Продолжить инкубацию для выявления желтых зон подкисления и/или красных колоний, которые связаны с зонами подкисления. Не учитывать колонии на пенопласте, т.к. они не находятся в селективных условиях. Не следует учитывать пузырьки, которые являются артефактами. Некоторые колиформные бактерии образуют большое количество кислоты. Для таких организмов желтые зоны подкисления могут сливаться при росте около 20 колоний на петрифильме. Площадь роста на петрифильме составляет примерно 20 см². При наличии свыше 50 зон подкисления подсчет можно проводить в одном или нескольких представительных квадратах. Найти среднее значение зон в квадрате. Умножив среднее значение на 20, получаем общее количество зон подкисления на петрифильме. 

Подсчет зон подкисления
- Предварительный учет колиформных бактерий основан на подсчете желтых зон подкисления (с красными колониями или без в центре) и проводится через 6-14 часов в соответствии с ВАМ и АОАС.

- Учет результатов в соответствии с AFNOR проводится через 14 часов ± 30 мин. Колиформные бактерии учитывают по желтым зонам подкисления (с образованием красных колоний или без колоний)

- Для подсчета колоний на петрифильме можно использовать стандартный счетчик колоний или увеличительное стекло. Область роста колоний примерно 20 см². Если количество колоний свыше 150, то для подсчета колоний находят среднее значение и умножают его на 20. 

Подсчет колоний, связанных с образованием газа
- Окончательный учет результатов колиформных бактерий в соответствии со стандартом ВАМ проводится через 8-24 часа и основан на учете красных колоний, образующих газ.
- Учет результатов в соответствии со стандартами ISO 4831, AFNOR проводится через 24±2 часа и основан на учете красных колоний, образующих газ.

Подсчет колоний, связанных с образованием газа или без газа
- Учет результатов в соответствии со стандартами ISO 4832, AFNOR проводится через 24±2 часа и основан на учете красных колоний, образующих или не образующих газ.

- При наличии большого количества колиформных бактерий (свыше 1000 КОЕ/петрифильм), вся зона роста на петрифильме может изменить цвет на желтый уже через 4 часа инкубации! В таком случае готовят серийные разведения образца.

- Колонии можно изолировать для дальнейшей идентификации. Для этого следует поднять верхнюю пленку и извлечь колонию из геля. Идентифицировать колонию с использованием стандартных методов.