Петрифильмы для количественного учета E.coli и колиформных бактерий
Описание
Петрифильм 3M Petrifilm E.coli/Coliform Count (ЕС) – содержит питательную основу среды VRB (кристаллический фиолетовый с желчью), гель, растворимый в холодной воде, который застывает при комнатной температуре, хромогенный субстрат для выявления глюкуронидазной активности (5-бромо-4-хлор-3-инолил-ß-глюкуронид – BCIG), тетразолиевый индикатор, который облегчает подсчет колоний. Петрифильмы (ЕС) используются для подсчета E.coli и колиформных бактерий в продуктах, сырье, а также при производстве безалкогольных напитков.
Хранение и утилизация
Хранить невскрытые упаковки с петрифильмами следует в холодильнике при температуре 2-8°C. Перед вскрытием упаковки с петрифильмами дать упаковке нагреться до комнатной температуры. Неиспользованные петрифильмы поместить обратно в упаковку. Запечатать упаковку скотчем. Чтобы предотвратить контакт с влагой, не следует хранить открытые упаковки в холодильнике. Хранить вновь запечатанные упаковки в сухом прохладном месте не более одного месяца. Нахождение вскрытых упаковок петрифильмов при температуре более 25°C и/или относительной влажности свыше 50% может повлиять на их эксплуатационные качества. Не использовать петрифильмы, на которых произошло обесцвечивание среды. Срок годности и номер партии указаны на каждой упаковке петрифильмов.
Как и все системы для тестирования микроорганизмов, петрифильмы после использования могут содержать жизнеспособные бактерии, что может представлять потенциальную опасность. Следуйте современным методам инактивации и утилизации биологического материала.
Инструкция использования
Подготовка образца
- Для разбавления образца использовать 0,1% пептонную воду, забуференную петонную воду, таблетки Рингера, физиологический раствор или дистиллированную воду. Не использовать буферные растворы, содержащие цитрат, бисульфит или тиосульфат, т.к. эти соединения могут ингибировать рост бактерий.
- Смешать и гомогенизировать образец.
- Для оптимального роста бактерий довести рН разведенного образца до 6,6–7,2. Для коррекции рН кислых образцов используйте 1 н. NaOH. pH щелочных образцов довести с помощью 1 н. HCl.
Внесение образца
- Поместить петрифильм Petrifilm E.coli/Coliform Count (ЕС) на ровную поверхность.
- Поднять верхнюю пленку и внести 1 мл разведенного образца на поверхность питательной подложки (в центр) петрифильма Petrifilm E.coli/Coliform Count (ЕС).
- Опустить верхнюю пленку (прокатывая) на образец. Избегать захвата пузырьков воздуха
- Сразу же поместить пластиковый распределитель в центр петрифильма ровной стороной вверх. Мягко надавить на центр распределителя для равномерного распределения образца.
Не скользить распределителем по пленке! - Убрать распределитель и оставить петрифильм на одну минуту для затвердевания геля.
Инкубация
Инкубировать петрифильмы в горизонтальном положении прозрачной стороной вверх. Петрифильмы можно группировать в количестве не более 20 штук. Инкубировать петрифильмы в течение (24±2) часов при (37±1)°C. В некоторых случаях (для выявления E.coli) следует продлить инкубацию до (48±4) часов при (37±1)°C. Установить емкость с водой для создания повышенной влажности в термостате.
Интерпретация
1) Количество колоний на петрифильмах можно учесть автоматически с помощью Petrifilm Plate Reader (PPR) (Петрифильм Ридера) или с помощью стандартного счетчика колоний или другого подсвечиваемого увеличителя. Не следует учитывать колонии на пенопластовом ограничителе зоны роста, они лишены селективных условий роста. Не следует учитывать пузырьки-артефакты, которые могут присутствовать на петрифильме.
Для учета E.coli следует подсчитать количество синих и красно-синих колоний, связанных с пузырьками газа, независимо от размера колоний и интенсивности окраски. Синие колонии без образования газа не учитываются как подтвержденные колонии E.coli.
Другие колиформные бактерии образуют колонии красного цвета, которые связаны с образованием пузырьков газа. Колонии, которые не связаны с образованием пузырьков газа, не учитываются как колиформные бактерии.
Общее количество колиформных бактерий, включает как красные, так и синие колонии, связанные с образованием газа в течение 24-48 часов.
Штаммы E.coli O157 не учитываются на петрифильмах данного типа, поскольку не обладают глюкуронидазной активностью, характерной для E.coli.
2) Зона роста составляет примерно 20 см2. Можно проводить учет колоний на петрифильмах, если их численность превышает 150 колоний. В этом случае подсчитывают количество колоний в одном или более репрезентативных квадратах и определяют среднее количество колоний в квадрате. Умножив среднее количество колоний на 20, получают число колоний на петрифильме.
3) При большой концентрации колоний на петрифильме может происходить потемнение цвета геля в зоне роста с наличием большого количества мелких, едва различимых колоний, а также много пузырьков газа. При высоких концентрациях E.coli зона роста может изменять цвет в голубой, тогда как высокие концентрации неколиформных бактерий вызывают изменение цвета зоны роста в темно-красный. В этих случаях результат фиксируется как слишком большое количество для подсчета. В этом случае необходимо приготовить разведение образца для получения более точного результата.
4) Колонии можно изолировать для дальнейшей идентификации. Для этого следует поднять верхнюю пленку и извлечь колонию из геля. Идентифицировать колонию с использованием стандартных методов.
5) По окончании инкубации петрифильмы можно хранить в морозильнике в течение одной недели при температуре (-15C°) для последующего учета. Проводится в тех случаях, когда нет возможности учесть численность сразу после инкубации.
В связи с изменениями курсов валют по вопросам, связанным с ценами, сроками поставки и наличию на складе следует обращаться к менеджерам.